IBSBIO siRNA-HiTransfer 说明书

siRNA-HiTransfer是一款专用于siRNA oligos转染的试剂，本转染试剂具有高稳定性、高转染率，作用机制是具有较强的压缩RNA的能力，能够把RNA高效率、迅速地输送到真核细胞之中，而不被核酸酶降解。本转染试剂对多种常见细胞、原代细胞和难转染细胞均具有较好的效果，毒性低、操作简便、重复性好。

应用领域：

n  原代培养细胞和转化细胞株的基因转染

n  siRNA高通量转染试验

n  核酸（siRNA、miRNA、tsRNA等）导入试验

n  贴壁细胞和悬浮细胞转染

siRNA转染：

1. 待转染细胞（以6孔板为例）

1.1 提前一天接种细胞，至细胞密度达到60-70%进行细胞转染。

注：细胞状态会极大影响转染效率，待转染细胞应处于良好生长状态，建议使用生长处于指数期、存活率大于90% 的细胞进行转染。

1.2 吸去原培养基，用 1×PBS洗涤细胞2-3次，加入1.9mL新鲜含血清完全培养基。

2. 准备转染试剂/siRNA复合物

2.1 参照表2对HiTransfer转染试剂进行稀释，对于待转染6孔板中的每孔细胞，取46μL无血清培养基与4μL HiTransfer转染试剂混合，用枪轻轻吹打混匀(V1)。

2.2 参照表2对 siRNA进行稀释，对于待转染6孔板中的每孔细胞，取47μL无血清培养基与

3μL siRNA(siRNA 60pmol)混合，用枪轻轻吹打混匀(V2)。

2.3将上述稀释好的HiTransfer转染试剂与siRNA轻轻混匀，得到HiTransfer转染试剂/siRNA复合物，室温孵育10分钟。

3. 加入HiTransfer转染试剂/siRNA复合物至细胞

将上述 100μL HiTransfe转染试剂/siRNA复合物加入每孔细胞（1.9mL完全培养+100μL复合物的总体积为2mL），轻轻混匀后于 37℃ 孵育 24-48小时。

4. 分析转染细胞

转染细胞培养 24-48 小时后，可根据实际情况用荧光定量PCR检测法、Western Blot等检测转染效果。

siRNA转染的优化:

可通过改变细胞密度、 siRNA浓度以及HiTransfer浓度对转染进行优化。 保证细胞融合度在60%以上 ，HiTransfer (µL): siRNA(pmol)可以在0.02:1和0.15:1之间调整。

运输条件：

常温运输

保存条件：

2-8℃保存1年

表2. 不同培养板所需转染试剂和siRNA的用量