转录因子荧光素酶报告基因质粒构建

服务简介:

转录因子是一种具有特殊结构的、在行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。

转录因子荧光素酶报告基因质粒是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。双荧光素酶报告基因检测已成为研究转录因子参与基因调控的有效手段,通过对启动子DNA片段的分析,验证启动子结合元件的反式激活能力,探讨转录因子在信号转导中的分子机制。

基本原理：

1. 构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒；

2. 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系，如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比；

3. 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。

推荐使用:

1. 检测转录因子和其靶启动子中的结合位点验证。

服务流程: