产品介绍

载体介导的miRNAi服务可以长期稳定的研究基因功能。载体在细胞中或者动物体内持续时间抑制基因的表达可以达数星期或者更久的时间。载体还可以在抗性筛选的情况下，构建稳定表达miRNA或者其抑制剂的的细胞系。 

服务流程

1.pSi-miRNA overexpression过表达载体构建:表达成熟或者前体miRNA分子。

pSi-miRNA overexpression过表达载体带有真核与原核抗性基因，原核抗性有壮观霉素、卡那霉素和氨卞青霉素可供选择，真核抗性杀稻瘟菌素，有新霉素，潮霉素可供选择 

pSi-miRNA过表达载体带有GFP绿色荧光蛋白报告基因，易于观察转染效率，适用于稳转细胞系的筛选

pSi-miRNA过表达载体可以串联多个miRNA

2. pSi-miRNA inhibitors 载体构建：表达miRNA inhibitors抑制剂 

3. pSi-miRNA overexpression/inhibitors载体的转染优化 

由于 miRNA载体是进入细胞后,在细胞核中表达，在细胞质中剪切后才能起作用，因此如何高效的将载体转入细胞是成功的关键步骤。为了使得实验获得最大化的转染效率，利用艾博思的专业的转染技术，针对多种真核生物细胞进行转染参数的细致优化。艾博思利用带有GFP报告基因的载体对于转染效率进行优化，直观可靠。

效果检测  

A.对于已知靶标的基因，或者预测靶标的基因。

通过Western blot方法检测蛋白水平的基因敲减效果或者通过带有miRNA结合位点的luciferase荧光素酶报告基因载体来分析。

B.对于未知靶标的基因

通过芯片进行筛查或通过miRNA array,gene array根据客户实际通量来进行筛查

客户提供

选择的细胞系和详细的细胞培养的操作步骤

选择的miRNA的Sanger ID或者名称；靶基因cDNA的序列号（GeneID，Accession Number,或者客户指定的特异序列）

高质量的抗体（如果需要进行Western blot检测）

我们提供

转染效率分析，转染的荧光图片或者根据客户要求提供FACS检测报告。

miRNA 表型分析或者芯片分析结果

• 如果确认mRNA水平没有变化，蛋白水平变化，提供荧光定量PCR详细的检测报告，Western Blot图片和检测结果等。

  
  

• 客户指定的细胞增殖和细胞毒性检测MTT、CCK-8，细胞凋亡和细胞周期的Annexin V/PI的FACS检测，Transwell等细胞功能学实验。

  
  

• 构建好的pSi-miRNA  overexpression或者pSi-miRNA inhibitors表达载体和相应的甘油菌；赠送阴性对照甘油菌。

  
  

• 正确的测序图谱

对照设置

阴性对照：使用mimics/inhibitors negative control vector，此序列经过严格的实验验证与已知哺乳动物基因无同源性，如果使用报告载体用于分析，与载体一起转染即可。

阳性对照：客户指定Paper公开发表的已经确认与靶基因表达有直接关联的miRNA，进行该miRNA mimics/inhibitors转染。