产品简介

荧光素酶报告基因系统是以荧光素(Luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化Luciferin氧化成Oxyluciferin，在Luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(Bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(Luminometer)或液闪测定仪测定Luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。

应用原理

circRNA荧光素酶报告基因载体是用来验证circRNA与miRNA结合的“miRNA sponge”分子海绵功能，通过荧光素酶报告基因实验（Luciferase Assay）是检测某个circRNA和靶标miRNA特异性结合，从而达到验证两者相互结合并发生相应生物学效应。

其原理简述如下：

（1）通过基因合成或者PCR产物克隆方法将circRNA特定结合位点的片段插入到荧光素酶报告基因质粒中，可选择的报告基因载体如psiCHECK-2，pmirglo，pGL系列等等。

（2）利用化学合成miRNA模拟物或者抑制物，把待检测的miRNA与以上报告基因质粒共转染293细胞或其它相关目的细胞系（首先的确认一下转染效率，预实验如果验证转染效率合适，可以在目的细胞中完成）。如果此miRNA能够与circRNA结合，则荧光素酶基因就会下调/上调，荧光素酶的表达量与miRNA/circRNA的相互作用强度成反比关系。

（3） 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光素，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断miRNA/circRNA的相互作用强弱关系。

服务介绍

以miRNA sponge模型为例，如果miRNAs在细胞内被吸附到circRNA上，理论上细胞内miRNA的总量不会产生变化，因此我们是无法通过qRT-PCR检测来判断miRNA是否吸附在circRNA环上。由此，我们可以通过生物信息学方法进行靶基因预测，有软件预测可能被吸附的候选miRNA，理论上当过表达circRNA后通过免疫学或者功能学方法检测miRNA的下游基因表达差异，可以间接反映circRNA 分子海绵的功能。有功能但是不能说明circRNA 与miRNA之间是有效的直接相互作用，因此双荧光素酶报告基因实验可以直接验证。

艾博思公司的技术人员利用psiCHECK/pmmirglo/pGL等质粒，转染目的细胞，由于载体带有两种荧光素，可以通过荧光素酶的比值直接反应miRNAs与circRNA的关系，从而验证circRNA/miRNA之间的作用是直接还是间接的。