化学合成siRNA(3保1)

化学合成的siRNA具有操作简便，转染效率高，对细胞或者组织的毒副作用小，可以大规模制备等优点，特别适用于基因靶位点不确定情况下进行siRNA有效片段的筛选工作。

1. siRNA的设计合成  

对于瞬时基因沉默试验，化学成的siRNA的方法操作简便，容易获得高水平的瞬时沉默效果，特异性强，转染效率高。艾博思经过专业化的设计团队严格的设计来增强siRNA的专一性；针对客户指定的靶基因设计3条siRNA，在转染效率大于80%情况下，可以保证其中1条在mRNA水平的Knockdown效率达到70%。

A) 普通siRNA 均由HPLC纯化，100%出去尚未配对的单链。

B）化学修饰siRNA 利用2’Ome，2’F修饰提高血清和培养基中的稳定性；作用时间长于普通siRNA。

C）荧光标记的siRNA 通过荧光标记可以示踪，可以检测转染的效率以及一些客户特殊的科研需求。

2. siRNA的转染优化 

由于siRNA是进入细胞后才能抑制基因的表达，因此如何高效的将siRNA转入细胞是成功基因基因表达的关键步骤。例如，siRNA抑制某一特定基因的抑制效率为95%，而转染效率为20%，那么最后抑制蛋白表达的最后的效率只有95% ×20%=19%，可见如何提高siRNA的转染效率是非常重要环节。为了使得RNAi试验获得最大化的感染效率，利用艾博思的专业的转染技术，针对多种真核生物细胞进行转染参数的细致优化。艾博思利用RNAi荧光标记的阴性对照、阳性对照对于转染效率进行优化，直观可靠。 

3. siRNA干扰效果检测  

用实时荧光定量PCR方法检测mRNA水平的基因敲减效果；通过Western blot方法检测蛋白水平的基因敲减效果

客户提供

● 选择的细胞系和详细的细胞培养的操作步骤

● 选择的靶基因cDNA的序列号（GeneID，Accession Number,或者客户指定的特异序列）

● 高质量的抗体（如果需要进行Western blot检测）

质量保证

● 针对客户指定的某靶基因设计3条 siRNA可保证其中1条在mRNA水平的沉默效果达到70%（在转染效率大于80%情况下）。

● siRNA进行科学周到的序列设计服务，防止脱靶效应和干扰素效应，满足客户的个性化需求。

● HPLC纯化，除去尚未配对的单链，产品经过严格的测试，确保质量的高度稳定。 

 作用原理

siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成RNA诱导的沉默复合物（RNA-induced silencing complex,RISC）。激活的RISC通过碱基互补配对定位到同源的mRNA转录本上，在距离siRNA 3’端12个碱基的位置进行切割mRNA。双链RNA正在起作用的是反义链。siRNA悬头选择可以是TT，UU或者任意碱基，总的原则就是以便反义链进入沉默复合体。 

对照设置

siRNA对照包括普通的阴性对照、荧光标记的阴性对照和siRNA阳性对照 

阴性对照：与目的靶细胞中所有基因无同源性的阴性对照

荧光标记的阴性对照：容易观察，可以方便地在荧光显微镜下观察转染效率，有利于优化转染条件。

阳性对照：作为一个试验系统的检查，确保在您的试验方法中您的转染，RNA提取和检查方法是否可靠，常用GAPDH,P53, beta-actin等基因的验证有效的 siRNA（Validated siRNA）作为阳性对照。

Superstar siRNA Set I：价格￥1280