微小RNA(microRNA,miRNA)是否可以对目的基因进行抑制或者降解的一类非编码RNA。目前已有相应的软件和网站可以进行预测, 但是其提供的数据只是理论上的。边择的miRNA是否能够抑制或者降解目的基因,还是需要通过相关的"miRNA靶基因验证实验"进行验证。
艾博思公司特推出“miRNA靶基因验证套餐”,为客户寻找或验证miRNA的靶基因。大致的实验流程如下:
1. 构建pri-miRNA表达载体(亦可采用化学合成的miRNA mimics)、靶基因3’UTR报告质粒。
2. 将pri-miRNA表达载体(或miRNA mimics、miRNA inhibitor)与靶基因3’UTR报告质粒共转染至293、CHO、Hela等工具细胞中。
3. 比较处理组与对照组的荧光素酶活性,确定目的microRNA和目的基因之间的关系。
4. 构建含突变靶位点的荧光素酶报告基因载体。
将pri-miRNA表达载体(或miRNA mimics、miRNA inhibitor)与含突变靶位点的靶基因3’UTR报告质粒共转染至293、CHO、Hela等工具细胞中,比较处理组与对照组的荧光素酶活性,验证前面初筛的结果。
客户须知:
pri-miRNA表达质粒或病毒、miRNA miimcs、miRNA inhibitor必须从本公司订购,本公司暂不接受外来的miRNA试剂。
插入的候选靶基因的3′UTR序列默认长度约为250bp,即预测靶位点序列加上两端各一小段序列。如客户需要插入更长的3′UTR序列,实验费用另外计算。