产品介绍

circRNA研究投稿时，审稿人会向你提问circRNA功能研究是否用了Antisense GapmeRs技术？当你一筹莫展时，艾博思生物帮你解答其中的奥秘！

反义核酸技术介绍

反义RNA是指与靶RNA(多为mRNA)具有互补序列的RNA分子，通过与靶RNA进行碱基配对结合的方式。参与基因的表达调控。反义核酸是指能与特定mRNA精确互补、特异阻断其翻译的RNA或DNA分子。利用反义核酸特异地封闭某些基因表达，使之低表达或不表达，这种技术即为反义核酸技术。它包括反义RNA、反义DNA和核酶(ribozymes)三大技术。反义核酶作为一种基因下向调节作用因子，在抑制一些有害基因的表达和失控基因的过度表达上发挥着重要作用。

反义核酸技术的机制

• 核酸酶H降解(RNase H degradation)机制

• 互补配对的原则

• 可以沉默mRNA和lncRNA

• 在体外和体内都可以起作用

反义核酸技术不光可以沉默mRNA、lncRNA和miRNA，还可以阻断circRNA

GapmeRs 设计方法

• GapmeRs 设计方法单链设计，降低了双链设计的脱靶效应

• GapmeRs进入RISC复合物，不会引起RISC复合物饱和效应

• GapmeRs两端LNA设计，增强稳定性和靶标的亲和力

• GapmeRs的DNA部分激活RNase H活性

GapmeRs 作用模式

导入的 GapmeRs与mRNA、lncRNA和circRNA接口位置完全互补结合，激活RNase断裂和降解mRNA、lncRNA和circRNA等等。

GapmeRs 在circRNA中的应用

设计针对circRNA的ASO序列

设置对照组：

A.control ASO

B.circRNA-1 ASO

注意：

1.在筛选ASO时候一般设计2条以上序列，保证成功率。

2.刚刚开始试验时候注意设置完整的对照组，包括阴性对照，阳性对照，浓度梯度，时间梯度等等。

不同浓度的ASO对于在4T1细胞中circRNA抑制效果，具有很强的抑制效用。

通过RNAmax转染试剂转染和通过ASO直接吸收，对比两种方法在前列腺癌中的对于circRNA-1的抑制效果。

在动物给药ASO，注射后6周，血液中的化学指标测试以及肝脏中circRNA-1表达水平降低表明ASO具有极佳的应用效果。

GapmeRs应用的小提示

• GapmeRs 在水中的溶解度可以到达50mg/mL；

• GapmeRs 在细胞水平功能实验中的孵育时间8h为宜；

• GapmeRs 转染的细胞密度10,000 /mL到100,000 /mL;

• GapmeRs 阴性对照是无同源性序列，但是当浓度>10 μM具有负效应；

• GapmeRs qRT-PCR验证，由于circRNA丰度比较低，注意假阳性问题；

• GapmeRs 作用效用具有细胞特异性，不同细胞需要设置不同浓度和不同时间点；

• GapmeRs 注射2h后进入组织和器官，最大耐受浓度达100–1000 mg/kg/week；